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一、早期藥物發(fā)現(xiàn)

一個(gè)自身免疫性疾病的治療藥物發(fā)現(xiàn)項(xiàng)目中，2H-吲唑類化合物被鑒定為高效的選擇性TLR 7/8拮抗劑。在先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)階段，化合物12被確定可進(jìn)一步進(jìn)行體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)研究。

圖1. 微克級(jí)樣品的合成路線

藥物的早期發(fā)現(xiàn)使得化合物12和作為關(guān)鍵中間體的化合物5（2H-吲唑）的需求迅速增加。項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)認(rèn)識(shí)到，該微克級(jí)的合成路線可能會(huì)在進(jìn)一步批量放大中產(chǎn)生問(wèn)題。分離不穩(wěn)定、潛在危險(xiǎn)的疊氮化物中間體4及其在熱環(huán)化為2H-吲唑5的工藝過(guò)程中有安全性的隱患。

【考慮到連續(xù)工藝在處理高活性、不穩(wěn)定化合物方面具有的優(yōu)勢(shì)，從間歇反應(yīng)切換到連續(xù)流工藝的多個(gè)驅(qū)動(dòng)因素中，安全性是最重要的一個(gè)因素。在需要快速合成化合物的早期臨床前階段，流動(dòng)化學(xué)作為一種新技術(shù)可以大大加快開(kāi)發(fā)過(guò)程?！?/span>

針對(duì)100克及以上規(guī)模的合成，團(tuán)隊(duì)啟動(dòng)了流動(dòng)化學(xué)的工藝研究，其主要目標(biāo)是保持反應(yīng)體積盡可能小，精確控制反應(yīng)條件，并避免在任何時(shí)間內(nèi)反應(yīng)混合物中危險(xiǎn)且不穩(wěn)定中間體的積累。

1. 間歇式工藝的連續(xù)流技術(shù)評(píng)估

圖2. 2H-吲唑類化合物5a的三步合成

將氨基醛2a轉(zhuǎn)化為疊氮化物4a，間歇式工藝采用了在酸性條件下使用亞硝酸鈉的重氮化方案，然后在0°C下添加NaN3,。該反應(yīng)通常在C2HF3O2（TFA）作為酸性介質(zhì)和溶劑的存在下進(jìn)行，可以獲得高收率的結(jié)果，并常規(guī)用于小規(guī)模合成。

【但含有疊氮化物4a的反應(yīng)混合物形成的懸濁液明顯不適合流動(dòng)化學(xué)篩選。而當(dāng)該反應(yīng)在水和鹽酸的混合物中進(jìn)行時(shí)，觀察到明顯較低的產(chǎn)率和大量副產(chǎn)物的形成?？紤]到下一步反應(yīng)，疊氮化合物4與氨基哌啶化合物6在Cu(I)催化的熱環(huán)化反應(yīng)仍然面臨不適合連續(xù)流工藝的固體溶解問(wèn)題。】

研究團(tuán)隊(duì)首先需要找到合適的反應(yīng)溶劑和試劑，對(duì)這兩步反應(yīng)來(lái)說(shuō)，合適的溶劑既要溶解所有的物料，又要保持高的轉(zhuǎn)化率。其次，作為另一個(gè)重點(diǎn)考慮的事項(xiàng)，需要避免疊氮化合物中間體4的分離。

2.  疊氮化合物4a生成的連續(xù)流工藝開(kāi)發(fā)

1）溶劑的選擇

• 研究者首先用亞硝酸叔丁酯和三甲基疊氮硅烷來(lái)代替無(wú)機(jī)物亞硝酸鈉和NaN3,，但僅得到了20%的轉(zhuǎn)化率。

• 接著，研究者發(fā)現(xiàn)利用二氯乙烷和水的兩相混合溶劑與C2HF3O2組合，可以將反應(yīng)體系中的物質(zhì)*溶解，并得到了很高的轉(zhuǎn)化率。

• 而其它酸的應(yīng)用，如乙酸、鹽酸、硫酸和四氟硼酸等，仍會(huì)造成沉淀的生成或者反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率降低。

  
  

2）工藝條件篩選

對(duì)該反應(yīng)仔細(xì)的研究揭示，需當(dāng)亞硝酸鈉*消耗后再向反應(yīng)混合物中添加NaN3,，如果過(guò)早加入NaN3,，它將立即被第一反應(yīng)步驟中剩余的未反應(yīng)的亞硝酸鈉所消耗。

圖3. 疊氮化合物4a的連續(xù)流工藝流程

【Entry 3的實(shí)驗(yàn)條件連續(xù)穩(wěn)定運(yùn)行60分鐘，可產(chǎn)中間體16g/h可滿足下游實(shí)驗(yàn)的需要?！?/p>

3. 2H-吲唑5a連續(xù)流工藝開(kāi)發(fā)

在完成重氮化及疊氮取代的連續(xù)流工藝開(kāi)發(fā)之后，研究團(tuán)隊(duì)繼續(xù)研究銅催化環(huán)化的連續(xù)流工藝。

1）間歇式工藝缺陷

• 間歇式反應(yīng)中，10% mol的氧化亞銅在體系中懸浮性差，不適合用于連續(xù)流工藝。

• 對(duì)于流動(dòng)反應(yīng)而言，80°C下反應(yīng)90分鐘的時(shí)間太長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致不可接受的低生產(chǎn)率。

• 這種環(huán)化反應(yīng)的收率通常合理的范圍在70?80%，研究團(tuán)隊(duì)使用LC-MS鑒定了兩種主要副產(chǎn)物氨基亞胺8a和氨基醛2a。

圖4. 2H-吲唑 5a反應(yīng)路徑及副產(chǎn)物確認(rèn)

2）對(duì)銅催化劑和配體的篩選

研究者發(fā)現(xiàn)，在1當(dāng)量TMEDA存在下，0.1當(dāng)量的碘化銅可溶于二氯乙烷中。經(jīng)反應(yīng)篩選后，研究者確定了流動(dòng)條件下環(huán)化的合適參數(shù)。

含有0.1當(dāng)量碘化銅（I）和1當(dāng)量TMEDA的0.45M 4a 二氯乙烷溶液，在120°C下，在20分鐘的停留時(shí)間內(nèi)，*轉(zhuǎn)化為吲唑5a。使用LC-MS分析反應(yīng)混合物表明，疊氮化物4a被*消耗，得到產(chǎn)物5a、氨基醛2a和亞胺8a，其比例分別為91.5%、3.4%和5.1%，與之前使用的間歇式工藝相比，有了顯著的改進(jìn)。

3）停留時(shí)間及銅盤(pán)管催化

為了縮短停留時(shí)間和提高生產(chǎn)率，研究者在尋求用更具反應(yīng)性的催化劑代替碘化銅（I）和TMEDA過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，內(nèi)徑為1mm的銅線圈也有效地催化了該環(huán)化反應(yīng)。推斷在銅線圈的內(nèi)表面上形成了少量的氧化銅（I），起到有效催化該反應(yīng)的作用。

圖5. 銅盤(pán)管反應(yīng)器催化反應(yīng)

作為概念證明，制備了0.32M的4a溶液，該溶液已與1.2當(dāng)量的胺6在甲苯中混合，并在120°C下泵送通過(guò)銅盤(pán)管，停留時(shí)間為20分鐘。使用色譜法進(jìn)行處理和純化后，分離出5.6g吲唑5a，產(chǎn)率為85%，純度為98%（圖5）。

4. 重氮-疊氮-環(huán)合三步全連續(xù)合成2H-吲唑類化合物

圖6.  2H-吲唑 5b的連續(xù)流工藝結(jié)果

利用上述研究結(jié)果，研究者同樣進(jìn)行了類似物5b的連續(xù)流工藝開(kāi)發(fā)。與最初使用的間歇合成相比，新的替代連續(xù)工藝不僅避免了危險(xiǎn)疊氮化物4a和4b的分離，而且為疊氮化物形成和熱環(huán)化這兩個(gè)關(guān)鍵步驟提供了更高的純度和產(chǎn)率。